關(guān)鍵詞：鴨坦布蘇病毒 可溶性表達(dá) 免疫原性分析 

摘要：鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)引起的一種以產(chǎn)蛋量和采食量嚴(yán)重下降為主要特征的傳染病。應(yīng)用RT-PCR方法擴(kuò)增DTMUV GDHD2014-3毒株的囊膜(E)蛋白全基因序列,并將其克隆至原核表達(dá)載體pMAL-c5x,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒E-pMAL。將其轉(zhuǎn)化E.coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化,在30℃條件下IPTG誘導(dǎo),可溶性表達(dá)重組的全長(zhǎng)E蛋白(rf E),大小約110 ku。用Amylose Resin對(duì)目的蛋白進(jìn)行純化,并將純化的rf E蛋白免疫Balb/c小鼠,制備多克隆血清抗體。經(jīng)Nu-PAGE以及Western blot分析,成功實(shí)現(xiàn)rf E蛋白可溶性表達(dá),并能與DTMUV滅活疫苗免疫鴨血清多抗產(chǎn)生特異性反應(yīng)。間接免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果表明,rf E蛋白免疫小鼠獲取的多克隆血清抗體能與DTMUV反應(yīng)。實(shí)現(xiàn)了rf E蛋白的可溶性表達(dá)及純化,并驗(yàn)證rf E蛋白具有良好的免疫原性,為DTMUV的亞單位疫苗的研制以及相關(guān)診斷試劑的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

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