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日本血吸蟲尾蚴及童蟲可溶性抗原蛋白質組研究

馬安 王越 湯益 楊再峰 施曉華 朱明東 劉曉龍 干小仙 浙江省醫學科學院寄生蟲病研究所 杭州310013 杭州市疾病預防控制中心地方病寄生蟲病防治所 浙江省醫學科技教育發展中心 杭州310006

關鍵詞:血吸蟲 日本 抗原 蛋白質組 

摘要:目的應用免疫蛋白質組研究方法篩選、鑒定日本血吸蟲尾蚴、童蟲可溶性抗原蛋白質。方法日本血吸蟲尾蚴可溶性粗抗原(scAP)、童蟲可溶性粗抗原(SLAP)分別用雙向凝膠電泳(2-DE)分離蛋白質,每樣本同時制3塊膠,1塊膠進行銀染,2塊膠通過電轉印后再分別用感染兔和正常兔血清作Western印跡分析,確定特異性陽性反應點,再從相應銀染膠圖上找到匹配的抗原蛋白質點;用MALDI.TOWTOF串聯質譜鑒定抗原蛋白質。結果SCAP、SLAP與感染兔血清免疫反應分別獲得94個和68個陽性點,在相應的銀染膠圖上分別獲得33個和31個匹配蛋白質點;用MALDI.TOF/TOF串聯質譜鑒定和NCBI數據庫檢索,鑒定成功率分別為100.O%(20/20)和68.2%(15/22)。已獲鑒定的SCAP抗原中蛋白酶占62.5%(10/16),SLAP抗原中蛋白酶占36.4%(4/11);2個抗原蛋白為SCAP和SLAP共有。結論2-DE能有效地分離日本血吸蟲可溶性抗原蛋白質,2-DWestern印跡法能較好地篩選特異性抗原;2-DWestern印跡法陽性點與2-DE膠圖蛋白質點匹配率低,低豐度的抗原蛋白質易被漏檢;尾蚴和童蟲的抗原蛋白質組差異較大。

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