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基于5-甲基胞嘧啶抗體的DNA甲基化電化學檢測

粟莎莎; 張姝; 黃健; 陳曦; 李艷; 方立超; 鄧鈞; 莫非; 鄭峻松 貴州醫科大學醫學檢驗學院; 貴州貴陽550004; 貴州醫科大學附院臨床檢驗中心; 貴州貴陽550004; 陸軍軍醫大學藥學與檢驗醫學系; 重慶400038

關鍵詞:dna甲基化 電化學傳感器 抗體 定量分析 

摘要:目的:構建一種基于5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗體的電化學生物傳感器,用于DNA多甲基化位點的定量分析。方法:采用納米金修飾金電極(AuNPs/Au),以自組裝方式依次將單鏈DNA(ssDNA)、巰基己醇(MCH)和靶DNA連接到AuNPs/Au上制備DNA電化學傳感器,經過電化學表征檢測電極修飾效果;再以5-mC抗體特異性識別靶DNA中的甲基化位點,并以辣根過氧化物酶標記二抗(HRP-IgG)為信號示蹤物,優化雜交時間及抗5-mC抗體濃度;采用差分脈沖伏安法(DPV)分別檢測非甲基化與不同數量甲基化DNA的電化學信號,同時考察該方法的重復性與穩定性。結果:電化學表征結果表明電極修飾成功,優化實驗條件結果顯示最優雜交時間為90 min、最佳抗體濃度為10 mg/L,在該條件下DNA電化學傳感器能有效區分甲基化與非甲基化DNA,并且DPV峰電流的大小與DNA甲基化位點的數量呈線性關系,具有較好的重復性與穩定性。結論:制備的DNA電化學傳感器能對多個位點的DNA甲基化定量檢測,有望成為臨床DNA甲基化位點定量檢測的有效手段。

貴州醫科大學學報雜志要求:

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