關鍵詞：豌豆蚜 孤雌生殖 翅型分化 mirna 靶基因 

摘要：【目的】前期研究發現麥長管蚜Sitobion avenae孤雌蚜有翅和無翅個體中存在很多差異表達的微小RNA(microRNA,miRNA),本研究旨在進一步明確這些miRNA在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum中發揮作用的發育階段,探索miRNA調控孤雌蚜翅兩型性分化的機制。【方法】選擇在麥長管蚜有翅蚜和無翅蚜中顯著差異表達,且靶基因為蛻皮激素、胰島素信號通路及翅型發育關鍵基因的5個miRNA(Let-7,miR-92a,miR-92b,miR-92a-1-p5和miR-277),利用qPCR檢測這些miRNA及其靶標基因在豌豆蚜3-4齡若蚜和成蟲有翅和無翅個體中的表達譜;同時利用雙熒光素酶活性檢測法對上述miRNA的靶基因進行驗證。【結果】表達譜分析發現,這5個miRNA在豌豆蚜成蟲中表達量均高于其在若蚜中的表達量,而其預測的靶基因在4齡若蚜中的表達量均高于其在成蟲中的表達量,表明miRNA對其靶基因的調控作用可能集中在成蟲階段。分析豌豆蚜有翅和無翅個體中5個miRNA的表達情況發現,在成蟲有翅個體中5個miRNA的表達量均高于無翅個體中的,其中miR-277表達差異最顯著,成蟲有翅個體中的表達量是無翅個體中表達量的7.5倍;其次為Let-7,表達差異達3倍。而Let-7在3齡有翅若蚜和無翅若蚜中表達差異最顯著,有翅個體中的表達量是無翅個體中的37.8倍;其次為miR-277,表達差異達7.6倍。比較5個miRNA與其靶基因在豌豆蚜3-4齡若蚜及成蟲有翅和無翅個體中的表達發現,miRNA Let-7和miR-92b的表達趨勢分別與其靶基因abrupt和Foxo的基本相反。熒光素酶活性檢測結果顯示,Let-7的真實靶標為abrupt,共轉染Let-7模擬物后與對照相比,熒光素酶活性下降53%,達極顯著水平。其他miRNA與靶標基因的互作不顯著。【結論】首次發現miRNA對豌豆蚜孤雌蚜翅型分化相關基因的調控可能發生在成蟲階段。Let-7可能通過調控abrupt基因參與孤雌蚜翅型分化。該研究為進一步探索miRNA參與?

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