鱖腦神經元的原代培養與鑒定

石林杰; 梁旭方; 何珊; 彭建 華中農業大學水產學院; 華中農業大學鱖魚研究中心; 湖北武漢430070; 農業農村部鱖魚育種創新基地; 農業農村部淡水生物繁育重點實驗室; 湖北武漢430070

關鍵詞:鱖 腦 神經元細胞 原代培養 

摘要:目前魚類神經細胞模型極少,物種間的差異性使鱖在細胞水平上的研究具有極大的局限性,為建立一種簡單易行的鱖腦神經元細胞模型進一步研究鱖神經系統,本實驗取3月齡鱖,聯合膠原酶消化法和機械吹打法分離出鱖腦細胞,用含20%FBS的L15培養液制成細胞懸液接種在細胞培養瓶內,于28°C無CO2培養箱中培養,3 d后更換培養基,待細胞貼壁長滿瓶底后進行傳代培養;采用Neu-N和β-tubulin免疫熒光細胞化學技術鑒定鱖腦細胞神經元純度。結果顯示,鱖腦細胞分離培養2 d后貼壁狀態較好,隨著時間延長,貼壁細胞增多,細胞突起相互連接,培養5 d后神經元胞體豐滿,細胞數量明顯增多,突起相互間形成了明顯的神經網絡。經Neu-N和β-tubulin免疫熒光細胞化學技術鑒定鱖腦神經元細胞純度可達95%以上。研究表明,該鱖腦細胞的分離培養方法簡單易行,且可獲得高純度的鱖腦神經元細胞。

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