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Sirtuin在低氧誘導人臍帶間充質干細胞增殖中的作用

王凱民; 譚娟娟; 嚴志強; 李志強 南方醫科大學第三臨床醫學院附屬奉賢區中心醫院神經外科; 上海201499; 上海交通大學生命科學技術學院; 上海200240; 南方醫科大學第三臨床醫學院附屬奉賢區中心醫院中心實驗室; 上海201499

關鍵詞:人臍帶間充質干細胞 低氧 增殖 sirtuin 

摘要:目的 探討低氧對人臍帶間充質干細胞(h UC-MSCs)中Sirtuin(SIRT)蛋白表達影響及與細胞增殖的關系。方法 組織塊貼壁法分離和培養h UC-MSCs;流式細胞儀鑒定細胞表面標志物;CCK-8法測定低氧與常氧下不同時間點h UC-MSCs的增殖能力;流式細胞儀檢測低氧與常氧下細胞周期的變化;免疫熒光與Western blotting測定低氧與常氧下細胞SIRT蛋白定位與表達。結果 成功分離h UC-MSCs;細胞CD90、CD105、CD29、CD44高表達,CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR無表達;CCK-8測定低氧培養24、48、72 h細胞的增殖能力均高于常氧培養(P均〈0.05);在低氧下培養24、48 h后S期細胞比率高于常氧培養(P均〈0.05);免疫熒光檢測SIRT1、6位于細胞核內,SIRT2定位于胞漿,SIRT3、4、5定位于線粒體。Western blotting測定SIRT1在低氧培養24、48 h蛋白表達量均高于常氧條件(P均〈0.05),常氧培養72 h的SIRT1表達量高于24 h及48 h(P均〈0.05);SIRT2表達量在低氧培養24 h高于常氧培養(P〈0.05),48 h后低于常氧培養,72 h后高于常氧培養(P〈0.05);低氧培養24、48、72 h后SIRT5的表達量均高于常氧處理(P均〈0.05),常氧與低氧培養細胞48 h和72 h后均高于24 h時SIRT5的表達(P均〈0.05)。結論 低氧處理24、48、72 h均可以促進h UC-MSCs的增殖。低氧誘導SIRT1、2與5表達改變提示SIRT1、2、5可能參與了低氧對h UC-MSCs增殖的調控。

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