關(guān)鍵詞：單克隆抗體 細胞株 工藝開發(fā) 

摘要：以PD-1分子為靶點,以中國倉鼠卵巢(CHO)細胞為宿主,構(gòu)建高表達抗PD-1單克隆抗體的細胞株,優(yōu)化細胞株篩選工藝,優(yōu)化工藝參數(shù),得到穩(wěn)定高表達PD-1細胞株。運用懸浮細胞CHO表達抗PD-1的抗體,首先在質(zhì)粒構(gòu)建中,將重鏈和輕鏈插到同一個載體上,保證了重鏈和輕鏈的比例為1∶1,實現(xiàn)共表達,輕重鏈在一個載體上,再同PD-1基因共轉(zhuǎn)染,對后面的基因擴增篩選提供基礎。采用懸浮培養(yǎng),使用化學成分確定的培養(yǎng)基CD培養(yǎng)基,支持重組CHO細胞的生長,達到高密度培養(yǎng),從而得到高表達蛋白。結(jié)果表明蛋白表達量穩(wěn)定性分析表明,篩選出兩株表達量較高的細胞株,表達量分別達到2.03g/L和2.09g/L,為抗PD-1抗體的生產(chǎn)提供了穩(wěn)定高產(chǎn)的細胞系。得到了穩(wěn)定高表達PD-1細胞株,且蛋白質(zhì)量與原研藥一致。

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