關(guān)鍵詞：杉木 cllar 基因克隆 序列分析 載體構(gòu)建 

摘要：為探究杉木種子發(fā)育過(guò)程中無(wú)色花青素還原酶(LAR)基因在類黃酮生物合成途徑中對(duì)原花青素(PA)合成的分子調(diào)控機(jī)制,以杉木種子為試驗(yàn)材料,通過(guò)RT-PCR結(jié)合RACE的方法成功克隆到杉木ClLAR基因全長(zhǎng),該基因的cDNA全長(zhǎng)為1625bp,具有1個(gè)1242bp的開(kāi)放閱讀框(ORF),編碼413個(gè)氨基酸。構(gòu)建pCambia3301-ClLAR植物表達(dá)載體,運(yùn)用凍融法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)至農(nóng)桿菌GV3101,通過(guò)花序侵染法獲得擬南芥轉(zhuǎn)基因植株,利用Basta溶液和PCR驗(yàn)證篩選出陽(yáng)性苗,確定目的基因ClLAR已整合至擬南芥基因組中。研究結(jié)果為深入分析杉木ClLAR基因調(diào)控PA合成的分子機(jī)制和ClLAR蛋白功能奠定了基礎(chǔ)。

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