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豬細小病毒7型SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法的建立及臨床樣品的檢測

趙冠宇; 解長占; 孫文超; 張赫; 那少龍; 李卓昕; 張涵; 李成輝; 哈卓; 李金鳳; 韓繼成; 南福龍; 莊忻雨; 張英; 金寧一 吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院; 吉林長春130062; 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院軍事獸醫(yī)研究所; 吉林長春130122; 溫州大學(xué)病毒學(xué)研究所; 浙江溫州325035; 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院; 吉林延吉133000; 吉林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院; 吉林長春130062

關(guān)鍵詞:豬細小病毒7型 實時熒光定量pcr 衣殼蛋白基因 

摘要:采用PCR方法擴增豬細小病毒7型(PPV7)衣殼蛋白基因保守區(qū)域493 bp,將其克隆到pMD18-T載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒作為標準陽性質(zhì)粒,以其為模板建立用于檢測PPV7的SYBR GreenⅠ實時PCR檢測方法,并驗證其靈敏性、特異性和重復(fù)性。結(jié)果表明,本試驗建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法在2.85×10^1~2.85×10^8拷貝/μL呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.995,斜率為4.158,靈敏度可達到2.85×10^1拷貝/μL。該方法對于豬繁殖障礙性傳染病常見病原如PRRSV、PCV2和PRV未出現(xiàn)特異性擴增,表明特異性好。所有標準曲線在溶解溫度為83.103℃時出現(xiàn)單一的特異峰。使用本方法檢測了2017年山東地區(qū)7家養(yǎng)豬場216份臨床樣品,總陽性率為12.5%。

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