關鍵詞：骨肉瘤 外泌體 癌相關成纖維細胞 肺轉移 腫瘤微環境 

摘要：目的探討癌相關成纖維細胞(CAFs)來源的外泌體對骨肉瘤侵襲及轉移的影響。方法利用人源骨肉瘤細胞株Saos-2采用差速貼壁法分離、培養CAFs,顯微鏡下觀察CAFs的形態,免疫組織化學觀察α-SMA蛋白表達對CAFs進行鑒定。培養CAFs,采用ExoQuick-TC外泌體提取試劑盒分離外泌體。通過透射電鏡觀察外泌體形態,Western blot檢測外泌體特異性標記蛋白β-actin、CD63表達情況對外泌體進行鑒定。培養人源骨肉瘤細胞株Saos-2,分為外泌體組和對照組,采用細胞劃痕及Transwell小室實驗觀察外泌體對Saos-2細胞遷移和侵襲能力的影響。選取一級5周齡BALB/c-nu雌性裸鼠12只,按編號隨機分為外泌體組和對照組,每組6只。兩組均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右側背部皮下接種人骨肉瘤Saos-2細胞與Matrigel基質膠混合懸液,建立裸鼠骨肉瘤腫瘤模型。造模結束后即刻進行尾靜脈注射:外泌體組每只裸鼠通過尾靜脈注射濃度為0.1μg/μL的外泌體懸液30μL,對照組裸鼠尾靜脈注射等量生理鹽水,兩組均1次/周,共注射6次。第1次注射后每日觀察裸鼠成瘤情況,從裸鼠右側背部皮下可觸及腫塊開始,測量兩組裸鼠腫塊的最長徑和最長徑的最大垂直短徑,計算腫瘤體積,此后每周測量1次,共測量6次。完成最后一次測量后腹腔麻醉斷椎法處死裸鼠,完整取出腫塊并稱重。取裸鼠肺組織進行切片HE染色觀察兩組裸鼠肺轉移情況。結果顯微鏡下觀察CAFs呈長梭形,排列雜亂,無方向性;細胞免疫組織化學染色結果顯示:CAFs的α-SMA蛋白表達陽性,提示CAFs提取成功。電鏡觀察外泌體呈70~100 nm圓形或橢圓形膜性囊泡狀結構;Western blot結果顯示外泌體中CD63蛋白呈高表達,β-actin蛋白表達較弱,提示成功分離CAFs來源外泌體。細胞劃痕實驗、侵襲實驗結果顯示:外泌體組細胞遷移距離、遷移率、侵襲細胞數目分別為(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%?

中華解剖與臨床雜志要求:

{1}注釋用尾注形式，注釋信息要規范。

{2}文稿請用Word格式，中文宋體，英文Times New Roman，小四字號，1.5倍行距，并注意大小寫與上下角標。

{3}摘要300字左右，關鍵詞3—5個，標題、摘要、關鍵詞等均無須譯為英文。

{4}所獲基金資助或課題經費資助的說明需加以說明（課題名稱及編號）

{5}引言應簡明概括論文的研究基礎、國內外研究現狀、研究目的與意義等。

注：因版權方要求，不能公開全文，如需全文，請咨詢雜志社