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抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白的制備、鑒定及理化特性分析

姜大川; 徐燕; 孫曉瑜; 王姹; 沈繼龍 安徽醫科大學口腔醫學院牙周黏膜科; 合肥230032; 合肥市第一人民醫院口腔科; 230001

關鍵詞:紫單胞菌 齦 免疫球蛋白類 動物 實驗 

摘要:目的制備牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的卯黃免疫球蛋白(immunoglobulin yolk,IgY)并評價其理化性質,以期為采用被動免疫抗體防治慢性牙周炎尋找新途徑。方法厭氧培養聘國際標準菌株ATCC33277,收集細菌,超聲振蕩至菌體完全破碎,離心,收集上清液,即為全菌可溶性蛋白抗原。羅曼母雞隔離飼養至5個月齡用于抗體的制備。以質量濃度為1g/LPg全菌可溶性蛋白抗原1ml與等量弗氏完全佐劑吹打混勻成油包水狀注射劑,經皮下和肌肉多點注射免疫母雞,共注射免疫4次,每次免疫間隔時間為10d。初次免疫即開始收集雞蛋,標記后4℃保存。提純免疫后不同時間的抗Pg-IgY,二喹啉甲酸總蛋白定量法測定蛋白濃度,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析鑒定,間接酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法進行IgY抗體效價變化和理化性質的檢測。結果通過免疫誘導出質量濃度為2.05g/L的特異性IgY,經SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測得相對分子質量分別為65000的重鏈和25000的輕鏈,與理論值一致;間接ELISA法結果顯示初次免疫后5d左右出現抗Pg-IgY,免疫后50~55d達峰值;抗體效價達到1:100000以上;一個雞蛋可以生產超過10mg的IgY,純度高達95%。結論Pg全菌蛋白免疫產蛋母雞可使雞蛋產生高效價、高濃度的特異性IgY,該抗體純度高、耐熱、耐酸堿,理化性質穩定,適合口腔環境。

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