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細(xì)胞培養(yǎng)氨基酸穩(wěn)定同位素標(biāo)記-質(zhì)譜技術(shù)測定槲皮素對人肝癌細(xì)胞熱休克蛋白表達(dá)的影響

周進(jìn) 方麗 姚文秀 趙新 魏陽 周行 謝華 王理揚(yáng) 陳俐娟 四川省腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 成都610041 成都醫(yī)學(xué)院第·附屬醫(yī)院消化內(nèi)科 四川人學(xué)華西醫(yī)院腫瘤中心

關(guān)鍵詞:槲皮素 hepg2細(xì)胞 熱休克蛋白 

摘要:目的觀察槲皮素對人肝癌細(xì)胞HepG2中熱休克蛋白(HSP)發(fā)達(dá)的影響,為其抗腫瘤活性探尋可能的靶點(diǎn)。方法經(jīng)過連續(xù)傳代,充分氚化HepG2細(xì)胞中的亮氨酸,并鑒定其標(biāo)記率。采用四早基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測槲皮素對HepG2細(xì)胞中的亮氨酸,并鑒定其標(biāo)記率。采用四早基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測槲素對HepG2細(xì)胞生長的抑制活性及有效濃度。以50μmol/L槲皮素作用氚化HepG2細(xì)胞45h后,與正常HepG2細(xì)胞按1:1等量混合電泳,提肽后時行質(zhì)譜鑒定,將獲得的肽片段數(shù)據(jù)進(jìn)行Mascot檢索。結(jié)論SILAC-MS成熟可靠,能全面定量分析外因作用前后HepG2細(xì)胞中全系列蛋白譜的變化,槲皮素對HepG2細(xì)胞中HSP表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抑制能力,并且這種作用可能是其發(fā)揮腫瘤活性的途徑之一。

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