時間:2022-05-29 23:01:14
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隨著生活節奏加快,社會競爭日益激烈,越來越多的人們感受到社會生活更為緊張,由此引發的情緒與心理問題日益增多。憤怒是負性情緒的核心[1],與健康和疾病的關系極為密切,有國外學者指出[2],具有憤怒傾向的人群更易出現健康問題。中醫認為,肝主疏泄,在志為怒,怒傷肝,長期或劇烈的憤怒情緒會阻礙肝疏泄氣機的功能,使氣機逆亂。頭為諸陽之會,五臟精華之血,六腑清陽之氣皆匯聚于腦,方有神明之用,若氣機逆亂,氣血不能正常輸布于腦,腦失濡養日久則可能導致腦老化加速。那么,憤怒情志對腦老化進程究竟有何影響?其機制如何?本研究借助動物實驗探討慢性憤怒應激對大鼠腦老化進程的影響及其部分神經內分泌機制。
1 材料與方法
1.1 動物及分組 Wistar雄性大鼠56只,SPF級3月齡,購于北京維通利華實驗動物技術有限公司(SCXK(京)2006-0009),體重為360±10g。在河南省食品藥品檢驗所動物實驗中心屏障環境設施動物實驗室(SYXK(豫)2005-0011)進行實驗,并由該實驗室提供標準實驗動物滅菌飼料。正常飼養3日后,按體重隨機分為空白對照組、D-gal衰老及腦老化模型組(簡稱模型組)、慢性憤怒應激組(簡稱憤怒應激組)三組,每組14只,其余14只作為攻擊鼠。各組分籠飼養,自由飲食飲水。(注:模型組予以注射D-gal,憤怒應激組在注射D-gal基礎上引入憤怒刺激。)
1.2 主要試劑及儀器 大鼠血漿E酶免試劑盒(美國R&D公司,批號:09-05);大鼠血漿NE酶免試劑盒(美國R&D公司,批號:09-05);大鼠血漿DA酶免試劑盒(美國R&D公司,批號:09-05);680自動酶標分析儀(美國伯樂);1575自動酶標洗板機(美國伯樂);HPS-250生化培養箱(哈爾濱市東聯電子技術開發有限公司);Morris水迷宮(成都泰盟科技有限公司)。
1.3 D-gal衰老模型 參考李文彬等[3] D-gal衰老及腦老化造模方法,模型組和憤怒應激組注射D-gal溶液,制作衰老及腦老化模型。具體方法:將D-gal溶于生理鹽水,濃度為2%,注射容量為0.01ml?g-1,每日1次,頸后部皮下注射,空白對照組注射同體積生理鹽水,連續6周。每周測體重1次,依所測體重計算注射容量。
1.4 憤怒應激組引入憤怒刺激的方法 課題組在夾尾間接激怒法[3]基礎上,受傳統直接電擊法的啟發,創立一種新型誘發大鼠憤怒情緒的方法――間接電擊激怒法。自實驗第三周始每天下午3點對憤怒應激組大鼠進行憤怒刺激。具體方法:使用特制電刺激儀作為電刺激工具,把憤怒應激組大鼠單獨放入特制金屬籠內,再隨機放進一只攻擊鼠,用一端電極觸碰攻擊鼠前部(電極的另一端與金屬籠相連以構成回路),攻擊鼠受電擊被激惹,對憤怒應激組大鼠發起攻擊,雙方互相撕咬、對峙,產生憤怒心理和行為。頻率為1~2次/min,每天刺激15min,連續4周。最后攻擊鼠丟棄不用。
1.5 標本采集及制備 實驗至第37天始,進行Morris水迷宮測試,為期6天。至第42天完成實驗后,禁食24小時,按每100g體重注射0.5~1.5ml 20%烏拉坦,麻醉后經腹主動脈取血4~5ml,靜置、離心,吸取上清液,-70℃保存,用于測定血漿腎上腺素(epinephrine, E)、去甲腎上腺素(norepinephrine, NE)、多巴胺(dopamine, DA)。
1.6 統計學方法 實驗結果用SPSS 13.0統計軟件包進行處理。數值變量以 進行統計描述。數值變量組間均數差異的比較,正態分布和方差符合齊性
檢驗后,采用單因素方差分析(One-way ANOVA),兩兩比較用LSD法,P
2 結果
2.1 慢性憤怒應激對D-gal大鼠空間學習記憶能力的影響表1顯示的是Morris水迷宮第6天的測試結果:憤怒應激組較模型組大鼠尋臺時間(searching platform latency, SPL)明顯延長(P
2.2 慢性憤怒應激對D-gal大鼠血漿兒茶酚胺的影響 與模型組相比,憤怒應激組大鼠血漿E、NE、DA含量均明顯升高(P
3 討論
學習記憶能力減退是衰老尤其是腦老化的重要表現,臨床上腦老化患者可呈現進行性精神狀態衰變,包括遠近期記憶力障礙、情緒改變、分析判斷能力衰退、行為失常等。本研究用Morris水迷宮檢測動物空間定位與學習記憶能力,結果顯示:憤怒應激組較模型組SPL明顯延長,提示持續的憤怒應激加重D-gal衰老大鼠空間學習能力減退的程度,加速大鼠腦老化進程。
E是由腎上腺髓質分泌的一種兒茶酚胺激素,在應激狀態、內臟神經刺激和低血糖等情況下,釋放入血液循環,促進糖原分解并升高血糖,促進脂肪分解,引起心跳加快。當人體經歷某些刺激(如興奮,恐懼,緊張等)時,分泌E,促使呼吸加快以提供大量氧氣,同時引起心跳與血液流動加速,瞳孔放大,為身體活動提供更多能量,使反應更加快速。
NE屬于神經遞質,也是一種激素,循環血液中的NE主要來自腎上腺髓質。目前認為中樞的NE神經元與交感-腎上腺髓質系統是兩個獨立的系統,但在情緒活動加劇時,兩者的活動都增強。NE系統適度興奮可能產生興奮和欣快的情緒,過度興奮則可能導致躁狂和攻擊行為,說明NE水平變化與情緒變化密切相關。血中E、NE水平,目前被公認為反映交感-腎上腺髓質功能狀態的可靠指標。本實驗結果顯示:接受憤怒刺激的憤怒應激組大鼠血漿E、NE含量明顯上升,可能是由于憤怒激活了交感-腎上腺髓質系統,導致大量的E、NE釋放入血。
DA由腦內分泌,屬于兒茶酚胺類,參與調節機體的覺醒、注意力和精神情緒狀態。中樞內多巴胺系統主要參與對軀體運動、精神情緒活動、垂體內分泌功能以及心血管活動等的調節。在應激情況下,DA神經元生理活動加強,當應激的強度或持續時間超過機體耐受能力時,將導致認知功能及操作能力下降。酪氨酸的充足供應能增強DA的合成和釋放,在一定程度上拮抗應激對中樞DA神經元的損害[4]。本研究中,模型組DA較空白對照組含量有下降趨勢,提示衰老有阻礙DA合成,降低認知能力的傾向;憤怒應激組DA含量較模型組明顯升高,提示憤怒情緒可引起血中DA含量增加。
三種兒茶酚胺E、NE、DA均可興奮HPA軸功能,導致HPA軸亢進,進而引起血中促腎上腺皮質激素(adrenocorticotrophic hormone, ACTH)、糖皮質激素(cortisol, CORT)濃度上升。海馬上糖皮質激素受體(glucocorticoid receptor, GR)表達最高,血中高濃度的CORT極易與GR結合,引起GR損傷,進而導致海馬組織受損[5-6]。海馬是學習記憶的關鍵部位,海馬損傷必將使大鼠學習記憶能力下降,加速腦老化進程。本研究中,長期憤怒應激使大鼠血漿E、NE、DA含量上升,且SPL明顯延長,表明血漿兒茶酚胺水平升高,大鼠學習記憶能力下降,提示出現腦老化跡象。因此可以認為,憤怒情緒長期積累引起血漿兒茶酚胺含量升高,從而進一步激活HPA軸,亢進的HPA軸分泌大量CORT,損傷海馬組織而加速腦老化進程。
參考文獻
[1] 詹向紅,劉勝利,江虹等. 憤怒情志表達方式及特質對自主神經的影響[J].中華中醫藥雜志.2011,26(7):1475-1478.
[2] Williams JE, Johnson AM, Heiss G, et al. Association between exposure to combat-related stress and psychological health in aging men: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study[J]. J Trauma Stress. 2010,23(3):358-366.
【關鍵詞】 施普善;低氧;高二氧化碳血癥;學習記憶;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3;海馬;大鼠
Abstract: Objective: To observe the effects of cerebrolysin on the learning-memory function and the changes of caspase-3 expression in the hippocampus of rats model with chronic hypoxia and hypercapnia,and to explore the probable mechanism. Methods: Thirty-two male S-D rats trained by eight-arm radial maze were pided into four groups: rats in the control group without treatment ;rats in chronic hypoxia and hypercapnia group were placed in the special closed cabin with hypoxia and hypercapnia for 8 hr a day, 6 day a week, 4 weeks and injected intraperitoneally with saline ;the rats in two treating group were injected intraperitoneally with 1 mg/kg and 2.5 mg/kg cerebrolysin, respectively. The learning-memory ability was measured using eight-arm radial maze and the expression of caspase-3 in the hippocampus was decteced with Western-blot.Results: Compared with the control group,the learning-memory ability was declined markedly and the expression of caspase-3 was increased significantly in chronic hypoxia and hypercapnia group. Nevertheless, the improvement of learning-memory and the less caspase-3 expression were observed in rats treated by two doses of cerebrolysin. Conclusion: Cerebrolysin may improve the learning-memory ability in rats with hypoxia and hypercapnia, which may be associated with the inhibition of the expressin of caspase-3 in the hippocampus.
Key words: Cerebrolysin;hypoxia;hypercapnia;learning-memory;caspase-3;hippocampus;rats
慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者存在不同程度的認知功能障礙[1],但其機制目前尚不清楚。王小同等[2]在一系列研究中,證實慢性低氧高二氧化碳動物模型大鼠存在空間學習和記憶障礙。施普善含有85%的游離氨基酸和15%低分子量生物活性肽,極易通過血腦屏障,具有神經保護和神經營養作用,已廣泛應用于癡呆、腦卒中、腦外傷等引起的腦功能障礙治療,取得良好的臨床療效。本研究建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型,觀察施普善對其學習記憶功能障礙的治療作用及腦組織caspase-3蛋白表達的變化,并探討其可能的機制。
1 材料和方法
1.1 材料
常壓低氧高二氧化碳艙(溫州醫學院肺心病研究室研制),Medlab生物信號采集處理系統(南京美易科技有限公司),八臂迷宮(溫州醫學院神經藥理研究所),八臂迷宮飼餌(浙江大學醫學院藥學院),施普善(Cerebrolysin,奧地利Ebewe藥廠,批號608260),caspase-3 抗體(Cell Signaling Technology公司),GAPDH優質內參(上海康成生物工程有限公司)
1.2 動物分組和模型制備
清潔級SD大鼠(溫州醫學院實驗動物中心提供)44只,體重280~310 g,經八臂迷宮訓練淘汰12只。32只大鼠隨機均分為4組:①對照組;②慢性低氧高二氧化碳組(模型組);③慢性低氧高二氧化碳施普善(1 mL/kg)干預組(施普善1 mL/kg組);④慢性低氧高二氧化碳施普善(2.5 mL/kg)干預組(施普善2.5 mL/kg組)。后3組大鼠適應性飼養3 d后,置于常壓低氧高二氧化碳艙(氧濃度在9%~11%,二氧化碳濃度在5.5%~6.5%,艙內溫度23~26 ℃,濕度50%~70%)內,每天8 h,在入艙前半小時按規定劑量分別予以腹腔注射生理鹽水和施普善;其余16 h放置于正常環境中。每周6 d,連續4周。
1.3 行為學測試
八臂迷宮測試:訓練方法參照文獻[3]方法進行訓練,稱量自由攝食狀態下大鼠的體重,訓練前大鼠禁食1 d,其后限食1 d,使其體重降至原體重的85%左右,在整個訓練期間限食并維持原體重的85%左右。大鼠在迷宮中預適應2 d,每天1次,第1天在八個臂中均撒上餌片任其自由攝食餌片10 min,第2天在固定的四臂中散上餌片(1、2、4、7臂),任其在迷宮中尋找食物10 min。訓練時,在選定的(1、2、4、7)臂中放置餌片,該次序維持到訓練結束不變,將大鼠放于迷宮中央區,用小桶蓋住,在迷宮中適應15 s后提起小桶放出大鼠,大鼠可以自由選擇任意一臂攝取餌片。大鼠進入有餌片的臂并攝取了餌片為一次正確的選擇不做記錄,重新進入放餌片的臂稱為工作記憶錯誤(working memory error,WME),第一次進入不放餌片的臂稱為參考記憶錯誤(reference memory error,RME),兩者之和為總的記憶錯誤(total memory error,TE)。訓練成功的標準:連續5次訓練錯誤選擇次數為≤1次,同時WME必須為零。
1.4 caspase-3測定
大鼠斷頭處死,全腦取出置于冰盤上,依次取出皮層、海馬,去除腦膜和血管,迅速稱重后保存于液氮備用。取部分組織按1:10(密度:體積)加入細胞裂解液,冰上勻漿,13 000 g離心20 min收集上清液,BCA法測定蛋白濃度,等量蛋白(20~50μg)經12%SDS-PAGE電泳后,電轉移至PVDF膜上,5%脫脂奶粉TBST室溫封閉1 h;加入相應一抗(Caspase-3及內參抗體GAPDH,1:1 000)4 ℃孵育過夜,TBST洗膜3次;加入HRP標記的相應二抗(1:10 000)室溫搖床孵育1 h,TBST洗膜3次;ECL試劑作用5 min,X光膠片曝光。沖洗并掃描后結果用quality one軟件分析雜交條帶灰度值,以GAPDH水平為內對照。
1.5 統計學處理方法
組間比較采用單因素方差分析。
2 結果
2.1 各組八臂迷宮測試結果
與對照組比,模型組大鼠WME錯誤次數和TE明顯增多,差異有顯著性(P
2.2 各組海馬中caspase-3的表達
如圖2所示。與對照組比,模型組海馬中caspase-3的表達明顯增高,差異有顯著性(3.287±0.682 vs 0.523±0.131,P
3 討論
本實驗模型組大鼠的WME,TE的錯誤次數均明顯增加,而RME增加不明顯。可見,慢性低氧高二氧化碳模型大鼠有空間學習記憶和工作記憶能力受損,且以短時記憶受損為著,與臨床上COPD患者的表現相似。
既往研究[4]發現,施普善具有類似神經生長因子樣作用,可重建皮層微管相關蛋白水平,恢復神經元正常細胞骨架,增加海馬和皮層樹突分支和突觸密度,影響血腦屏障葡萄糖載體的表達,增加大腦葡萄糖運輸,改善神經元的能量代謝,從而發揮其神經營養活性。切除海馬穹隆傘造成學習記憶功能障礙的大鼠,給予施普善治療后,不僅改善記憶能力,而且改善獲得新信息的能力[5]。本實驗顯示,施普善干預組大鼠的TE,WME,RME錯誤次數較模型組明顯減少,認知功能明顯改善,提示1 mL/kg和2.5 mL/kg兩種劑量施普善具有快速改善慢性低氧高二氧化碳引起的認知功能障礙的作用。
動物實驗證實,慢性低氧可導致腦組織結構和功能的損害,細胞凋亡在其中起著重要作用。喻林升等[6]研究發現,與對照組相比,慢性低氧高二氧化碳模型大鼠腦微血管和神經元的超微結構發生改變,神經元變性、壞死和凋亡,海馬神經元的凋亡尤為明顯。徐浩等[7]實驗進一步證明,慢性低氧高二氧化碳可誘發大鼠海馬神經細胞凋亡。已有研究報道,大鼠學習記憶功能受損與海馬神經元的凋亡有密切關系[8]。Barhwal等[9]發現低氧環境中雄性Sprague Dawley大鼠水迷宮測試中工作記憶能力下降,海馬中凋亡蛋白如caspase-3表達明顯增高。本試驗發現模型組大鼠海馬的凋亡因子caspase-3表達顯著增強,而1 mL/kg和2.5 mL/kg兩種劑量施普善干預組大鼠海馬組織中caspase-3表達明顯下降。可見,慢性低氧高二氧化碳增加了大鼠海馬組織的細胞凋亡,而施普善的干預抑制了大鼠海馬組織的細胞凋亡,從而減輕海馬組織的損害。
Hartbauer等[10]采用低血清(2%胎牛血清)培養基的雞胚端腦神經元細胞應激模型,觀察施普善對神經元活性和程序性細胞死亡的影響,發現施普善治療后的培養基中神經元,凋亡相關的染色質改變顯著減少,證實腦施普善的肽類成分具有抗凋亡作用,從而發揮長期的神經保護效應。Yuan等[11]等研究表明,施普善可能通過調節細胞凋亡級聯反應,尤其通過caspase等因子的激活,從而引起細胞色素C釋放、Apaf-1復合體形成等發揮作用。當然,施普善對于海馬神經元抗凋亡的保護機制目前仍不清楚,有待進一步的研究證實。
參考文獻
[1]Ozge C,Ozge A,Unale O. Cognitive and functional deterio-ration in patients with severe COPD[J]. Behav Neurol, 2006,17(2):121-130.
[2]王小同, 陳松芳, 邵勝敏, 等. 慢性低氧高二氧化碳對大鼠認知功能與CREB表達的影響[J]. 溫州醫學院學報,2007,37(5):418-421.
[3]Huang YW, Chen Z, Hu WW, et al. Facilitating effect ofhistamine on spatial memory deficits induced by dizocilpineas evaluated by 8-arm radial maze in SD rat[J]. ActaPharmacol Sin, 2003, 24(12):1076-1270.
[4]Ruether E, Ritter R, Apecechea M, et al. Sustained improve-ments in patients with dementia of Alzheimer's type (DAT)6 months after termination of Cerebrolysin therapy[J].Jour-nal of Neural Transmission, 2000, 107(7):815-829.
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[6]喻林升, 張旭, 高申孟. 慢性低O2高CO2大鼠腦神經細胞凋亡及P53蛋白表達研究[J].中國神經免疫學和神經病學雜志,2002,9(3):178-179.
[7]徐浩, 王小同, 徐漫歡, 等. 慢性低O2高CO2對小鼠神經元凋亡及硝基酪氨酸表達的影響[J].溫州醫學院學報, 2007, 37(6):519-521.
[8]Lucassen PJ, Vollmann-Honsdorf GK, Gleisberg M, et al.Chronic Psychosocial stress differentially affects apOptosisin hippocampal subregions and Cortex of the adult tree shrew[J].Eur J Neurosci, 2001, 14(1):161-166.
3月28日
上課時間
3月30日
星期三
第5節
班級
8.3
授課人
教學目標:
1、熟練使用橢圓工具,能夠繪制正圓、橢圓,為圖形修改顏色。
2、掌握形狀補間動畫的制作方法。
3、培養學生的動手能力,小組合作能力。
【重點】形狀補間動畫的制作方法
【難點】理解形狀補間動畫的原理及實際意義
學習過程
環節
學習內容及預見性問題
時間
學法指導
激情
導入
課前欣賞歌曲《水調歌頭》
1’
欣賞歌曲
學習
目標
學習目標:
1、使用橢圓工具繪制正圓、橢圓,能夠修改圖形顏色。
2、能夠制作形狀補間動畫。
1’
齊讀
明確目標
問題
導學
任務一
制作月圓月缺逐幀動畫
探究1:
從滿月到月牙需要插入多少關鍵幀既工作量較少又過渡自然?月缺如何繪制?
繪制月圓——月缺的變化
1、需要關鍵幀為_______幀。
2、月圓月缺主要變化過程
【提示】利用橢圓工具繪制月亮
思考:如何繪制一個正圓?___________鍵
任務二
為你的月圓月動畫添加缺形狀補間動畫
探究2:
添加形狀補間之后發生了什么樣的變化?用自己的語言來描述發生的變化。測試影片,觀察此時動畫效果。
15’
4’
請以小組為單位展開探究活動,在導學案中設計出月圓到月缺的幾個關鍵變化過程,試著畫出來。
自主完成
小組展示、匯報組間評價
小組探究
獨立完成
組內互助
練習
鞏固
拓展
提升
【練一練】
在后兩個關鍵幀之間也進行同樣的操作,為每兩個關鍵幀之間添加形狀補間動畫。
探究3:
試著將中間的關鍵幀刪除,只留下首尾的關鍵幀,測試影片,看你的動畫有什么變化?
【提示】清除關鍵幀的方法
選中要刪除的關鍵幀,右擊,選擇“清除關鍵幀”
拓展提升
為你的動畫添加靚麗的背景
【提示】:
(1)【文件】菜單——【導入】——【導入到庫】
(2)【窗口】菜單——【庫】,調出庫
(3)到庫中找到你需要的背景圖片,添加到舞臺上,調整位置。
(4)背景圖片要單獨放在一個新的圖層。
請新建背景圖層于月亮圖層的下方。
實例操作
師:那么,現在就請同學們跟我去認識一下什么是“形狀補間動畫”;
引入形狀補間動畫的概念:使一個對象逐漸變成另一個對象,實現兩個對象間(顏色、位置、大小、形狀的平滑過度。(2min
注意,對象必須是矢量圖,要分離的,直到出現小白點。
同學們看看下面這幾組對象那個才是正確的呢?
四、作品展示
學生進行展示作品。
師:同學們的自學能力非常強,恭喜大家順利完成了任務二的挑戰,其實,第二個任務不同于第一個任務的是對象,這個任務中需要將對象進行分離。也就是說,制作形狀補間動畫的對象必須是矢量圖,(也是點擊后出現白色小點,如果不是必須先進行分離,直到出現白色小點為止。
16’
小組展示
小組交流
分析原因
自由創作,為自己的作品添加背景。
展示最終成果
組間、組內評價
總結
提煉
自我
評價
知識總結:
1、在繪制正圓時,需要借助鍵盤上的______鍵。
2、形狀補間動畫:在_____個關鍵幀之間添加了形狀補間就好比補充了若干個中間幀的效果,實現了圖像由_______關鍵幀到_______關鍵幀的平穩變化,這種動畫叫做形狀補間動畫。
3、添加形狀補間動畫的方法是:___________
_______________________________________
請結合你的學習情況進行評價并簡要記錄學習過程中的體會與收獲
3’
回顧本節課重點知識,理清脈絡
一、目的:為了讓自己的大學生活過的充實,更是為了自己能學有所成。使自已不要在畢業后從這里職業生涯規劃范文走出而后悔。充分利用自已的時間過好人生最關鍵的三年。
二、目標:讓自己具備會計專業要求的所有技能,并熟悉廣告設計與制作專業所需的全部基本技能與知識。能夠實現現就業應聘演講稿代審美欣賞能力的廣告專業人才和廣告設計師,要能熟練熟練的掌握各種廣告設計軟件與又能運用廣告設計理論創作設計各種大眾傳播的廣告的視覺藝術作品。
三、需掌握的知識體系:
主體知識層:
素描、色彩、設計概論、裝競選班干部演講稿飾圖案、字體設計、平面構成。色彩構成、標志設計、廣告攝影、書籍裝幀、廣告設計、VI策劃與設計、包裝設計、圖形創意、廣告概高中二學習計劃書范文論、報刊廣告設計、報刊廣告設計、展示設計、
輔助知識層:
Photoshop和Coreldraw。autoCAD和3DMAX。制作技術主要是:掌握各設計及制作手段及廣告制作與輸出技術。學生畢業后可面向各類廣告公司和企業廣告部門、專業設計公司、網站媒體大學生就業與創業設計、報刊出版及雜志、印刷設計大學生就業現狀論文公司、包裝公司、從事專業設計制作及設計管理工作。
四、要取得的證書:
《中華人民共和國設計師職業資格證》和《高等學院畢業證》英語四級以上
五、實現方法:采用課外學正常教學以外的內容
六、實現步驟:分四個階段實現
第一階段:
時間:____年__月__日到__年___月___日大學生就業創業ppt目標:_______________
學習內容:______________
學習的具體方案
具體計劃:早上__點___分到___點__分學習_________
晚上__點__分到__點__分學習_________
計劃檢驗與修整___年__月__日對學習_____進行評估
AAA-大學生就業和創業評估結果:__好__良__壞__
【大學新學期學習計劃書】
時光悠悠, 一年半載已經流走。 而此時,已經是大二的第二學期了。即又是一個新的開始。像一簿畫冊一般, 翻過舊的一頁篇章, 新的一幀是空白的藍圖等著我去描畫。而在每個畫家下筆之前,腦海中都會簡單描掕一份初稿。以便灑筆出一份最完美的作品。
新的學期,我將面臨準備三件大事: 3月份的黨員考試,4月中旬的韓語能力中級考試以及6月中旬的大學英語6級考試。首先,當務之急,便是眼下即將來到的3月中旬的黨員考試。在上個學期期末,我已經參與了入黨前的黨課,而3月份,我就將參與此次的入黨資格檢測,黨員考試。在半個月的時間內,我會熟讀并牢記《入黨教育及指南》,能有效地滲透作為黨員的基本素質要求,并盡全力在三月份的黨員考試中取得優異的成績,之后,在入黨觀察期間表現優異以取得黨員資格。
其次,第二件大事即是在4月中旬的韓國語能力中級考試。作為專業課的能力測試,可想而知,此次考試的重要性。也是接觸熟知韓國語以來第一次正式并且專業地對于自己韓國語能力的客觀評價。為了能在韓語中級考試中有滿意的優異表現,普通的努力是不夠的,一定要將自己的潛能化,付出比平時更多的汗水,才有可能在中級考試中出現優異的成績。
若只是一味地懈怠并自滿,及時有天賦運氣也不會照顧你。 好運只會眷顧努力并勤懇的孩子。所以比起之前的日子,新學期必定會更加忙碌與充實,為了有令人欣喜的成績,會調整新的學習計劃及方法,這樣才可提高學習效率,在最短時間內有很大的韓語實力進步。才能以狀態迎接4月中旬的韓語中級能力測試。
然后,韓語能力中級測試過后,就將在6月份迎來大學英語6級。在上個學期一段時間的用工學習下,順利地過關了大學英語四級。但6級遠沒有4級來得輕松。所以,為了能萬無一失地順利度過英語6級,更多的實力及答題技巧是必不可少的。
【關鍵詞】 大蒜素; 阿爾茨海默病; 行為學;抗氧化能力
大蒜素是大蒜的主要成分,具有抗腫瘤、抗氧化、抗血小板聚集、提高免疫、清除自由基、護肝、降血脂、降血壓及預防心血管疾病等生理學作用〔1〕。因其具有較好的脂溶性,可通過血腦屏障,因此在防治腦血管病方面的作用也備受關注。研究資料顯示,大蒜素可改善血液流變性、增加腦血流量、清除自由基、改善腦功能及減輕急性腦梗死時缺血再灌注損傷〔2〕。大蒜素作為一種具有良好發展前景的天然抗氧化藥物,具有抗氧化延緩衰老的作用〔3〕,同時對腦缺血再灌注大鼠海馬神經元具有保護作用〔4〕,而氧化應激和海馬神經元的損傷是阿爾茨海默病(AD)的主要發病機制。本研究采用D半乳糖致小鼠AD模型,從組織形態學角度,觀察大蒜素對AD腦組織的保護作用及對小鼠學習記憶能力的改善作用,并對其抗氧化機制進行初步研究,為臨床應用大蒜素防治AD提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 實驗動物 健康昆明雌性小鼠30只,清潔級,體重18~22 g,湖南長沙市開福區東創實驗動物服務部提供,批準號:001847。
1.2 藥品與試劑 大蒜素腸溶膠囊(20 mg/粒,湖北金龍福藥業有限公司,批號H42022592),D半乳糖由國藥集團化學試劑有限公司提供(批號20050422),兔抗P38 MAPK、SABC免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒由武漢博士德有限公司提供,考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒及超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 主要儀器 BX51 系統顯微鏡(Olympus)、微量進樣器(上海安亭微量進樣器廠)、UV3100PC型紫外可見分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)。
1.4 動物分組及造模 按照改良的Morris法對60只小鼠進行連續7 d Morris水迷宮定向航行訓練〔5〕。每天分上下午2個時段,每個時段訓練2次,并記錄小鼠從放入水槽至找到平臺的時間(逃避潛伏期),若120 s仍找不到平臺,則由實驗者將小鼠放置于平臺上,逃避潛伏期記為120 s,并讓小鼠在平臺上休息30 s。根據訓練成績,選擇成績較好的30只小鼠。按體重分層隨機分成3組: AD模型組,大蒜素治療組,陰性對照組。每組10只。AD模型組與大蒜素治療組皮下注射12.5% D半乳糖40 μl,連續60 d。
1.5 給藥方法 大蒜素治療組在造模的同時按10 ml/kg進行腹腔注射大蒜素腸溶膠囊提取物0.48 g·kg-1·d-1;AD模型組和陰性對照組給予相同劑量的生理鹽水,連續60 d。
1.6 水迷宮行為學檢測 連續給藥60 d后,對小鼠進行改良的Morris水迷宮法檢測,記錄小鼠的逃避潛伏期,評價各組大鼠記憶能力的改變。
1.7 抗氧化活性檢測 行為學檢測結束后,用25%的烏拉坦麻醉小鼠后固定于自制的手術板上,置于解剖盤中,開胸暴露并游離心臟。切開右心房,經左心室插入灌流4℃生理鹽水20~30 ml,直至肝臟顏色轉白及右心房流出液澄清后,繼續灌注4%甲醛20~30 ml,取腦組織海馬部組織塊1 cm3 左右,4%甲醛浸泡固定24 h后,做石蠟組織切片。測定殘余腦組織重量,按重量體積比加4℃生理鹽水制成10%的組織勻漿,離心(2 500 r/min,10 min),取上清液,置4℃備用。測定SOD 活力和MDA 含量。
1.8 組織形態的觀察 分別采用HE染色和鈴木神經組織鍍銀改良法〔6〕染色觀察小鼠海馬神經細胞及神經原纖維纏結(NET)。
1.9 統計學方法 數據用x±s表示,兩個樣本比較采用t檢驗,多個樣本均數比較采用單因素方差分析,所有統計由SPSS17.0軟件處理。
2 結 果
2.1 大蒜素AD模型小鼠學習記憶能力的影響 改良的Morris水迷宮記錄小鼠的潛伏期,實驗結果顯示,AD模型組小鼠的潛伏期(54.25±4.34) s,明顯長于大蒜素治療組(6.67±1.81) s和陰性對照組(12.18±3.94) s,差異有統計學意義(P0.05)。
2.2 MDA、SOD測定 大蒜素治療組和陰性對照組MDA 含量較AD模型組顯著降低(P
2.3 小鼠海馬區域切片HE染色和鈴木神經組織鍍銀改良法染色結果 HE染色結果顯示,AD模型組海馬區腦組織可見小膠質細胞增多,神經細胞數量減少,細胞散失,排列不成行,組織疏松;大蒜素治療組海馬區腦組織可見神經細胞普遍細長,細胞排列較規整;陰性對照組海馬區腦組織神經細胞排列整齊,少數細胞濃染,見圖1。鈴木神經組織鍍銀改良法染色結果示,模型組海馬區腦組織切片可清楚看到大量NET;大蒜素治療組海馬區腦組織切片錐體細胞顯示清晰,均未見到NET;對照組海馬區腦組織切片中錐體細胞顯示清楚,形態正常,未見NET,見圖2。表1 大蒜素對AD模型小鼠腦組織SOD活性和MDA 含量比較
3 討 論
AD是發生在老年期或老年前期的一種中樞神經系統慢性漸行性退行性疾病,以腦細胞內NFT 、細胞外老年斑(SP) 以及大量神經元丟失為主要病理特征〔7〕。國內外研究證實,自由基引起的氧化損傷是不同病因誘發神經退行性疾病的共同通路〔8〕。大量的自由基能夠損傷生物大分子使蛋白質、DNA和脂質過氧化,致使神經細胞凋亡和缺失,導致學習和記憶障礙,進而導致或加重AD。
大蒜素又名大蒜新素,化學名為二烯丙基三硫化物,其結構式為CH2=CH-CH-S-S-S-CH2-CH=CH2,是大蒜的主要有效成分。藤田勛等〔〕研究表明大蒜素的抗氧化活性部位是S(O)SCH2CH=CH2基團,其中烯丙基位的氫與抗氧化活性有關。有研究表明,大蒜素對小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有明顯保護作用〔9〕,其機制可能與提高抗氧化酶活性,抗脂質過氧化損傷及抗炎作用有關〔10〕。本研究表明大蒜素能改善AD模型小鼠學習能力和記憶功能,有效地清除腦組織過氧化代謝產物MDA,增強SOD的活性,提高了機體的抗氧化能力。因此,可以推斷大蒜素可以用來早期干預或預防AD,改善AD患者認知、記憶等臨床癥狀。
參考文獻
1 邵力鈞,單文衛.大蒜素的臨床應用進展〔J〕.中國現代醫生,2009;47(3):453.
2 史載樣,張久亮,毛建生.大蒜素注射液治療急性腦梗死101例臨床研究〔J〕.中西醫結合急救雜志,1999;6(9):3904.
3 劉 浩,崔美芝,董 娟.大蒜素抗氧化延緩衰老作用的實驗研究〔J〕.中國老年學雜志,2006;26(2):2522.
4 郭莉華,李清君,胡玉燕,等.大蒜新素對腦缺血再灌注大鼠海馬的保護作用及對P53蛋白表達的影響〔J〕.中國病理生理雜志,2009;25(2):264.
5 聶榮慶,張 進,胡國柱,等.腦細胞活性因子對小鼠學習、記憶能力的影響〔J〕.中國行為醫學科學,2002;11(5):4882.
6 賴 紅,田應燮.鈴木神經組織鍍銀改良法在石蠟連續切片中的應用〔J〕.解剖科學進展,1995;1(4):347.
7 St GeorgeHyslop PH,Petit A.Molecular biology and genetics of Alzheimer′s disease〔J〕.CR Biol,2005;328(2):11930.
招生對象:小學一年級至高中三年級
輔導科目: 語文 數學 英語 物理 化學 地理 歷史 政治 奧數(奧數輔導請不要在電話中談,可以說思維數學或者數學提升)
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部分課程簡介:
【高二化學一對一輔導課程】
在完成了基礎化學的學習后,這個階段,要學習《反應原理》和《有機化學》兩本教材。課程輔導突出重要知識點的把握,引導學生形成化學思維。
重點掌握化學反應與能量變化、化學反應速率與化學平衡、平衡移動、等效平衡及圖像分析、總結復習化學平衡、弱電解質的電離知識;
把握水溶液中的離子平衡、PH值的計算和溶液的酸堿性、鹽類的水解、離子平衡綜合、原電池、電解池、電化學應用等知識點。
--教學心得
對于成績差的學生:
結合生活經驗,滲透化學原理,讓學生了解物質的性質,在生活生產中廣泛的用途。
幫助學生掌握化學規律與技巧。
注重基礎知識的落實,采用“理解、歸類、對比、聯想、口訣、諧音”等多種記憶方法結合。
對于成績需要拔高的學生:
--招生年級:
小學一年級至高中三年級
--輔導科目
小學課程:語文、數學、奧數、英語、小升初專項輔導
初中輔導:語文、數學、英語、物理、化學、生物、地理、歷史、政治
高中輔導:語文、數學、英語、物理、化學、生物、地理、歷史、政治
--校區分布
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校區分布:和平區、皇姑區
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部分課程簡介:
【高三物理一對一個性化輔導】
課程設置:個性化課程講解
適用范圍:高三 物理
課程特色:從簡單的、基本的抓起,少而精講。培養學生思考理解能力。
課程定位:加強對所學知識結構體系的把握能力,重視說理、論證和表達能力的培養。
--教學心得
對于成績中上游需要拔高的學生:
a.分析學生較為薄弱的知識環節(詞匯/語法/解題技巧),施予較集中的基礎鞏固和拔高練習;
b.及時誘導,鼓勵學生為下一次的小小進步而努力;
c.要求學生在瓶頸期階段,加強課前檢查和課后多練習,并提高做題能力;
2011年,在公司全方位的步入正規和本地易購網站(bendiyigou.com)日點擊率pv向5萬沖刺時,作為工作人員的我應該為公司盡一份微簿之力,因此特擬定以下幾點:
一、業務部的專業化服務
業務員的拉訂單的方式應該有所改變,不應該像以前那樣去做業務,我們應該更專業化,這個專業化我的建議是體現在這幾個方面:第一,與去訪客戶做交談之前一定要對客戶做全面而深入的了解,如果對客戶了解的甚少,那么在探討和溝通的時候就會又很大的問題,經常就會莫名其妙的丟失客戶;第二,我們應該知道客戶的問題所在,客戶的問題就是我們的希望,因為只要我們能幫助客戶解決他們所遇到的難題,客戶就有很大的可能和我們簽單,如有的客戶說以前也做過推廣但效果不好,我們就要清楚這個客戶是像要找一個推廣效果好的推廣商,那么我們就可以說出我們與其它的推廣不同的地方,而最重要的是要說明我們的推廣效果。讓他們信服我們一定能給他們帶來他們想要的結果;第三,業務員還應該對本地易購的產品和服務有更深入的了解,這樣業務員才能根據客戶的要求快速的向客戶推出公司相關的產品和服務;第四,業務員應該準時,守時,把客戶作為自己心目中的上帝。第五,帶新人學會如何找客戶?如何打電話?如何與客戶交談?如何介紹公司?如何專業的介紹業務?不能少于5次;特別是在電話營銷的時侯,一定讓主管當著新人的面給客戶打電話。讓新人學習該怎么說,說些什么。而且我們公司的經理基本都是從業務員做起的,都是非常優秀的業務員,他們比主管有更豐富的經驗。在帶新人的時侯,經理更應該教授新人如何做。
當然這些都是專業化服務的最基本的要求,其實還有很多需要業務員自己去整理和歸納,在這里作為我個人計劃的一部分像公司提出一些意見,希望公司越來越興旺。
二、公司的制度化管理
在2011年公司為了提高業務量并加強員工的管理,曾試著通過分組和拿提成的方法來提高員工的工作積極性和公司的業務量,但是實行一段時間后發現:組與組之間,成員與成員之間是提高彼此的積極性,然而后來我們又發現了一些不好的效果。成員之間因為業務的關系彼此之間的合作關系大大不如以前了。導致成員之間經常因一些小事而不和,而且最重要的是因為合作出了些問題,因此當然業務量的增加不如預先估計的那么好。顯然公司在管理層面上是有些問題的,世界500強的大公司之所以能做的比其他公司好,最主要的原因就是因為管理模式上比其他公司更勝一籌。而其中對業務員的管理更顯得重要,因為一個公司的銷售做的好,公司才有利可圖,而銷售又與業務員有至關重要的聯系。故我認為公司應該擬定一套層次化、責任制具有執行力的制度,并加強對業務員的培訓和管理。對這個制度我的看法是:首先應該把公司的員工劃分到各個部門,對每個部門來說,進行專業化的培訓,這樣分工明確公司的效率才會提高,而且各個部門應該設立一個負責人,負責各個部門的工作安排和人員調動。并每個月由負責人舉行各個部門的部門會議,并把討論結果和建議向唐總匯報,同時唐總只須下達指示和看其結果給予評價或者追究責任實行獎懲。還可以通過一些獎勵機制來提高員工的責任心和積極性,如全勤獎等。其次公司向前發展,就應該越來越細致了,不能還像剛成立那樣去經營,應該考慮的更細致,更專業了,這個細致和專業不是說說就算了的,重要的是讓客戶感受到,這樣才好吸引更多的客戶。因此,這就要我們大家一起探討我們的服務那里還有不足的地方。再次對于業務員來說,這個管理是最重要的,我的建議是業務員上崗之前應該對我們公司和服務有深刻的了解,因此之前一定要進行好培訓。應把一些業務做的好的員工作為帶頭人,帶領整個業務員隊伍的發展,可以讓他們傳授經驗,當然他們的作為帶頭人是業務精英,公司應該采取獎勵機制,這樣公司就會朝著業務精英的方向發展。總之,公司的發展一定要體現制度化和專業化了,到目前為止推廣效果基本上達到了預期的效果了,關鍵就在于公司服務的質量上了,也就是說人們都知道了本地易購,關鍵是人們對你的服務質量的認可了,所以重在提高服務的品質了。
三、技術部的熱忱服務
技術部主要負責給公司做網頁和提供網絡技術方面的處理工作,是公司的幕后英雄,有不可替代的作用。技術部在給客戶做網頁的時候經常會遇到客戶的反復的修改要求,在這里我們要知道客戶是上帝,我們應該盡量滿足客戶的要求,我們要不厭其煩,直到達到客戶滿意的效果為止,當然我們作為網頁方面的專業人員,有很多方面的知識客戶可能并不了解,對與客戶提出的無理要求,我們同樣要不厭其煩的向客戶解釋清楚,直到讓客戶知道這一切都是為了客戶好,只有這樣才能保證我們的客戶,同時也達到了一個很好的宣傳效果。
技術部的工作人員,在網站制作方面懶散,不管是什么樣的網站都應該同等對待,像網站小的話,應該按時按量的完成,直到客戶的認可和滿意。一個網站的制作到結束,技術部都沒有一個至始至終的人。總是喜歡脫脫拉拉,這樣的做法即給業務人員帶來很不滿的情緒。這樣即影響業績的發展,同時也給客戶帶來不好的效益和口碑。所以希望唐總好好給技術部工作人員分配一下工作,同時也為了整個公司的發展,因為技術部可是我們公司幕后最大的功臣。 1
2011年業務員個人工作計劃相關:
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這些都是我對公司提出的一些小小的意見,這些意見出現在我的個人計劃書之中是要說明空洞的計劃書還不如寫一點建議,至少能給公司帶來一些實際作用。當然在2011年里我的計劃其實很簡單,首先就是我希望我所負責的工作都要出色完成,并更加積極的配合大家一起把公司的業務搞上去;其次就是我要更好的提升自己,多學一些與公司發展有關的知識;再次就是我要改正自己在工作中做的不好的地方,并希望得到同事的批評和指正;最后就是我要和同事和睦相處,互相配合。真心的祝愿我們的公司在唐總的領導下越來越紅火。
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創新創業教育是一種旨在培養學生的創新精神、創業意識和創業能力的教育,是解決大學生就業難和建立創新型國家的必然選擇。在高職院校大力開展創新創業教育是高職教育教學改革的重要途徑,通過改革人才培養模式,促進專業改革與建設,帶動課程體系、教學內容和教學方法的改革,為我國社會主義現代化建設培養高素質、高技能、應用創新型人才。
一、創新創業課程體系的界定
創新創業課程體系既包括獨立開設的創新創業類實體課程,又融入包括公共基礎課、專業課的滲透性課程;既包括創新創業基礎理論課程,又包括創新創業的模擬性、體驗性實訓課程。此外,還包括以在校大學生為主體的有組織、面向社會的創新創業實踐活動和校園科技文化活動中的創新創業部分。
二、創新創業課程建設中存在的問題
課程建設是創新創業教育中的一個核心問題,是實現人才培養目標的基本保障。目前許多高職院校都在大力開展創新創業教育,但是,多數院校僅僅是增設“職業生涯規劃”、“就業指導”課程,或者組織個別有較強創新意識的學生參加各省、國家“挑戰杯”大學生創新創業計劃競賽,這導致創新創業教育不規范、不系統、針對性不強,大部分學生很難得到訓練。究其原因,是大多數高職院校沒有將創新創業教育理念貫穿到整個專業人才培養目標中去,開設的創新創業課程也沒有真正融入到專業課程體系中,沒有形成以創業為主線的系統的、完善的創新創業課程體系。
三、高職會計專業創新創業課程體系的建設
全面提高高職會計專業學生的素質,培養學生的創新意識和創業能力以適應時展的需要是當前高職會計教學改革的趨勢。在高職院校會計專業開展創新創業教育,其課程體系應圍繞會計專業人才培養目標與專業課程體系來設置,建立一套完善的創新創業教育課程體系,將創新創業教育融入到專業課程體系中,并考慮課程內容的前后銜接、連貫及過渡關系,其設置可分為理論課模塊和實踐課模塊。
1.理論課模塊。
(1)創新創業基礎理論課
創新創業基礎理論課是對創新創業知識做一個全面系統的了解并向學生傳授與創新創業相關的核心知識的課程,屬于獨立開設的課程,可以通過講座和專題等多種方式開展教學,由會計專業的老師和會計專家進行講授會收到較好的教學效果。
如在第一學期安排《專業教育》的學習,讓新生對自己的專業和未來的職業有所了解,以便合理地制定大學學習目標和學習計劃;開設《職業生涯與發展規劃》、《創新性思維》、《就業指導與創業教育》課程,通過講授創新創業基本知識、介紹成功人士創業經歷等培養學生創新創業的思維意識;開設《創新與創業精神》、《創業心理與技能》、《創業管理》等課程,著重培養學生的創新精神、加強學生對創新創業構想設計和技能的訓練;開設《現代企業管理》、《市場營銷》等課程,傳授給學生與創業有關的知識。
(2)融入專業理論課程教學過程中的創新創業教育
這種方式不需要打破現有的課程體系,主要是在已開課程中挖掘開發、增強和融入創新創業教育的內容。將與創新創業有關的道德和品質課程融入兩課的教學過程中;將與創新創業知識與能力有關的課程融入會計專業課(會計實務、財務管理等)的教學中。
2.實踐課模塊。
(1)融入會計實訓課程教學過程中的創新創業教育
傳統的會計專業實訓課程主要是以專業核算技能為主,會計實訓的動態仿真性差,無法體現出會計是如何參與企業的管理,而且會計實訓多數是獨立的實訓,無法培養學生的團結合作精神。解決這一問題行之有效的辦法是引入ERP沙盤模擬實訓,即在基礎會計實訓、財務會計實訓、管理會計實訓、財務管理實訓、會計綜合實訓課程中增添ERP沙盤實訓內容,創建一個仿真的企業環境,建立起動態的實訓體系,幫助學生建立創新創業教育所需的知識體系,促進、激發和增強學生的創新創業能力,以及學生的團隊協作能力和溝通能力。
(2)賽事和活動